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3.NADPH对KA介导的神经兴奋性毒性的保护作用及其机制
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星级:5 | 
刘子琦 刘娜 黄偲偲 王燕
摘要:目的:研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Reduced Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate, NADPH)在海人藻酸(Kainic acid, KA)介导的兴奋性毒性中的作用及其分子调控机制。方法:采用KA处理体外培养的大鼠原代皮层神经元,建立神经兴奋性毒性体外模型;KA处理细胞之前,用NADPH预处理,建立NADPH处理组。通过CCK-8法检测KA模型组和NADPH处理组原代神经元的存活率,观察KA对原代神经元的损伤作用以及NADPH对KA介导的兴奋性毒性损伤的保护作用;通过超氧化物阴离子荧光探针(Dihydroethidium, DHE)标记,检测KA模型组和NADPH处理组的原代神经元活性氧水平的变化;通过Western Blot检测KA模型组和NADPH处理组的自噬相关蛋白水平的变化,包括LC3和p62。结果:本实验成功建立了大鼠神经兴奋性毒性的体外模型。CCK-8结果显示,KA介导的兴奋性毒性引起神经元损伤,并且具有一定的时间依赖性,NADPH能显著增加神经元的存活率。DHE结果显示,KA引起细胞内ROS水平显著增加,给予NADPH能有效降低ROS水平。Western Blot结果显示,KA引起p62蛋白表达下调和LC3-II/LC3-I蛋白表达上调,NADPH可抑制KA引起的以上蛋白的表达变化。结论:在KA介导的神经兴奋性毒性体外模型中,NADPH通过抑制细胞内的氧化应激和自噬,从而发挥保护神经元的作用。
6.化疗药物剂量对HEK293细胞MDR1基因表达的影响
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星级:4 | 
黄方婷 张旭燕 朱瑞宇
摘要:目的:紫杉醇(PTX)和阿霉素(ADM)是目前常用的两种化疗药物,被广泛用于肿瘤细胞的治疗,但同时也会对肾脏带来的副作用。多药耐药基因 (multipledrug resistant gene-1,MDR1)调控p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,其将细胞毒性药物跨膜运输出胞外,在一定程度上对细胞有保护作用。但不同化疗药物介导人肾上皮细胞(HEK293)MDR1表达的水平尚不明确。本研究通过检测化疗药物PTX和ADM对HEK293细胞MDR1基因表达的影响,为选取避免肾损伤的合适的化疗药物浓度提供了参考。方法:本研究选取了P-gp的转运底物紫杉醇(PTX)和阿霉素(ADM),用MTT法检测HEK293细胞对这两种药物的敏感性。然后用不同的药物浓度处理HEK293细胞,PTX(0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,1 ng/mL)、ADM(0,1,5,10,20,30,40 ng/mL),Western Blot法检测HEK293细胞中P-gp蛋白的表达情况。结果:在PTX浓度为0.3 ng/mL和ADM浓度为20 ng/mL时,会诱导P-gp表达达到峰值。而当继续增加药物浓度P-gp的表达量会减少且HEK293细胞活率大幅降低。结论:化疗药物的浓度会影响正常肾细胞中的MDR1基因调控P-gp的表达,从而影响P-gp将药物外排对细胞的保护效果。通过对化疗药物PTX和ADM不同浓度介导HEK293细胞P-gp表达的量化分析,为筛选合适的化疗药物浓度以避免肾损伤提供了参考。